Мероприятия

Баннер
 

Альбуминовый флюоресцентный тест: расположение флюоресцентного зонда к-35 в лекарственных центрах молекул альбумина

magazine-effermed-2012-03-004

Альбуминовый флюоресцентный тест: расположение флюоресцентного зонда к-35 в лекарственных центрах молекул альбумина

Альбуминовый флюоресцентный тест основан на использовании флюоресцентного зонда N-(p-карбоксифенил)имида 4-(диметиламино)нафталевой кислоты (названного К-35). Как было показано ранее, в растворах сывороточного альбумина человека (ЧСА) и в разбавленной сыворотке крови зонд К-35 связывается с молекулой ЧСА. При этом интенсивность флюоресценции возрастает во много раз. Связывание происходит с первым лекарственным центром молекулы ЧСА. Значительный вклад в энергию связывания вносит Кулоновское взаимодействие отрицательного заряда молекулы К-35 с положительными зарядами этого лекарственного центра. В данной работе показано, что анионы нитрата NO3 – способны ослабить это Кулоновское взаимодействие зонда с ЧСА. Есть два механизма такого нарушения. Первый является неспецифическим и состоит в повышении ионной силы раствора при добавлении нитрата. Таким же действием обладают и анионы хлорида Cl–. Однако обнаружен и второй механизм: он является специфическим и состоит в связывании аниона NO3 – с положительно заряженной гуанидиновой группой остатков аргинина ЧСА. В первом лекарственном центре ЧСА есть кластер положительных зарядов, в который входят остатки аргинина 218 и 222. Таким образом, молекула зонда К-35 располагается в связывающем центре так, что ее отрицательно заряженная карбоксильная группа прямо связана либо с Arg218, либо с Arg222. Ранее было замечено, что добавление нитрата выявляет нарушения флюоресценции К-35 при психических заболеваниях. Возможно, при патологических процессах могут происходить малые изменения конформации первого лекарственного центра вблизи Arg218 или Arg222.
Albumin fluorescent test: localization of the fluorescent probe k-35 in drug-binding sites of albumin molecules
Albumin fluorescent test is based on using a fluorescent probe K-35 (N-(p-carboxyphenyl)imide of 4-(dimethylamino)naphthalic acid). Recently it has been shown that K-35 binds with human serum albumin (HSA) both in HSA solutions and diluted serum. After binding, fluorescence intensity rises many times. K-35 binds to the first drug-binding site of HSA molecules. Significant contribution into the binding energy can be attributed to the Coulomb interaction of the K-35 negative charge with the positive charges of the drug-binding site. In this work it has been shown that the nitrate anions NO3 – are able to weaken this Coulomb interaction probe-HSA. There exist two mechanisms of that weakening. The first one is unspecific, that is rise of the ionic strength at nitrate addition. Chloride anions influence by the same manner. However the second mechanism has been found as specific: anion NO3 – is able to interact with positively charged guanidine groups of arginine residues of HSA. There exists a cluster of positive charges which includes arginine residues 218 and 222 in the first drugbinding site of HSA. It can be suggested that the K-35 negatively charged carboxyl group interacts directly with Arg218 or Arg222 in the HSA binding site. It has been found earlier that nitrate addition allows to detect some deviations of K-35 fluorescence in mental diseases. Results of this work lead to suggestion that some small changes of the HSA site conformation near Arg218 or Arg222 could accompany pathological processes.

 

 
Рассылка
Важно

→ Фармакопейные статьи


→ Медицинские архивы на службе современного врача


→ Перечень медицинских технологий

ЭКД архив

 

Баннер
Баннер
Баннер
Информационные партнеры:
Баннер
Баннер
Баннер
Баннер
Баннер
Баннер
Баннер
Баннер
Баннер
Баннер
Баннер
Баннер